产品货号：
RFT108
中文名称：
T4 DNA连接预混反应液
英文名称：
2×ligation MasterMix
产品规格：
150μl
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
2×ligation MasterMix是含有T4 DNA连接酶、连接反应缓冲液的2×MasterMix，实验时，只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μL连接体系计算，每次使用5μL，可以使用30次。
保存：-20℃
按照10μL连接体系计算，每次使用5μL，可以使用30次。
一、DNA片段和载体DNA的连接
二、线性DNA的自身环化
三、接头连接
相关搜索：T4 DNA连接预混反应液，T4 DNA连接MasterMix，2×ligation MasterMix
| 组分 | 规格 |
| 2×ligation MasterMix | 150μL |
保存：-20℃
按照10μL连接体系计算，每次使用5μL，可以使用30次。
- 2×ligation MasterMix由于含有T4 DNA ligase，使用前冰浴中彻底融化，混匀后使用。
- 为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
一、DNA片段和载体DNA的连接
- 粘性末端的连接
- 反应体系
成分 用量(10μL体系) 终浓度 线性载体DNA x μL 10～50ng 插入DNA片段 y μl 插入片段：载体=1:1～5:1* 2×ligation MasterMix 5μL 1× ddH2O 至10μL
注：
载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng（0.025pmol），10μL连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。 - 彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件：16℃孵育30分钟。
- 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注：- 若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
- 若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
- 若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
- 反应体系
- 平末端的连接
- 反应体系
成分 用量(10μL体系) 终浓度 线性平末端载体DNAa x μL 10～50ng 插入DNA片段 y μL 插入片段:载体=1:1～5:1b 2×ligation MasterMix 5μL 1× ddH2O 至10μL
注：- 平滑末端的载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
- 载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng（0.025pmol），10μL连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
- 平滑末端的载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
- 彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件：16℃孵育30分钟。
- 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注：- 若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
- 若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
- 若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
- 反应体系
二、线性DNA的自身环化
- 反应体系
成分 用量(10μL体系) 终浓度 线性载体DNA x μL 10～50ng 2×ligation MasterMix 5μL 1× ddH2O 至10μL - 彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件：16℃孵育30分钟。
- 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1～2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注：
若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
三、接头连接
- 反应体系
成分 用量(10μL体系) 终浓度 线性DNA x μl 100～300ng 磷酸化接头 y μl 0.5～1μg 2×ligation MasterMix 5μL 1× ddH2O 至10μL - 彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件：16℃孵育30分钟。
- 65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。
相关搜索：T4 DNA连接预混反应液，T4 DNA连接MasterMix，2×ligation MasterMix